Por Paulo Hora
Estudo mostra que células-tronco mesenquimais podem substituir camada alimentadora de origem animal para o crescimento das células-tronco embrionárias humanas
Células-tronco embrionárias humanas, em geral, requerem o co-cultivo sobre uma camada alimentadora para se manterem indiferenciadas. Entretanto, o uso de camada alimentadora de origem animal é incompatível com a aplicação clínica. Assim, novas fontes de células humanas como camada alimentadora ou condições de cultivo sem camada alimentadora devem ser estabelecidas.
Para investigar se células-tronco mesenquimais humanas derivadas do sangue menstrual são capazes de substituir os fibroblastos de embriões de camundongo como camada alimentadora para as células-tronco embrionárias humanas da linhagem H9, Danúbia Silva dos Santos, do Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho (IBCCF – UFRJ), defende sua tese de mestrado. Sob o título “Células-Tronco Mesenquimais Humanas Derivadas do Sangue Menstrual como Camada Alimentador para as Células-Tronco Embrionárias”, o trabalho orientado pela professora Regina Coeli dos Santos Goldenber será apresentado na próxima segunda-feira, 10 de setembro, às 9h, na sala G1-022 do Anfiteatro Hertha Meyer, no Centro de Ciências da Saúde da UFRJ (CCS).
No estudo de Danúbia, isolaram-se dois tipos celulares e cultivados em DMEM F-12 e DMEM-High Glicose, respectivamente. Após a terceira passagem, células-tronco mesenquimais humanas derivadas do sangue menstrual e fibroblastos de embriões de camundongo foram inativados com Mitomicina C por 3 horas. Para testar a capacidade das células-tronco mesenquimais como camada alimentadora, células-tronco embrionárias humanas foram cultivadas sobre elas e sobre embriões de camundongo sobre as mesmas condições de cultivo.
Crescimento, proliferação, sobrevivência e manutenção do estado indiferenciado das células-tronco embrionárias humanas foram avaliados. Quando cultivadas sobre células-tronco mesenquimais humanas derivadas do sangue menstrual, apresentaram morfologia semelhantes, expressaram fosfatase alcalina detectada pelo o kit comercial (Millipore), fatores de transcrição Oct-3/4, Sox2 e Nanog por RT-PCR e SSEA-4 e Oct-3/4 pelo ensaio de imunofluorescência. Cabe ressaltar que nenhuma das células de ambas as camadas alimentadoras expressaram essas proteínas.
Os resultados mostraram que as células-tronco mesenquimais humanas derivadas do sangue menstrual são uma alternativa adequada para substituir camada alimentadora de origem animal para o crescimento das células-tronco embrionárias humanas. O tamanho médio das colônias das células-tronco embrionárias humanas cultivadas sobre células-tronco mesenquimais humanas derivadas do sangue menstrual foi maior quando comparado ao tamanho médio das colônias das células-tronco embrionárias humanas cultivadas sobre fibroblastos de embriões de camundongo. A análise dos fatores de crescimento revelou a amplificação dos transcritos FGF-2, BMP4, TGF-β1, VEGF e PEDF por RT-PCR antes e após a inativação.
Além disso, quando células-tronco embrionárias humanas provenientes do cultivo sobre células-tronco mesenquimais humanas derivadas do sangue menstrual e fibroblastos de embriões de camundongo foram cultivadas em suspensão, foi observada a formação de corpos embrioides de tamanho e morfologia semelhantes. Foi observada também a expressão de genes dos três folhetos embrionários pelos corpos embrioides formados por células-tronco embrionárias humanas provenientes do cultivo sobre células-tronco mesenquimais humanas derivadas do sangue menstrual e fibroblastos de embriões de camundongo.
A expressão de Oct-3/4 reduziu significativamente em corpos embrioides formados por células-tronco embrionárias humanas provenientes do cultivo sobre células-tronco mesenquimais humanas derivadas do sangue menstrual em comparação ao MEF. Como conclusão, as células-tronco mesenquimais humanas derivadas do sangue menstrual foram capazes de manter as células-tronco embrionárias humanas no estado indiferenciado com uma eficiência comparável com a camada alimentadora padrão fibroblastos de embriões de camundongo.